Monkeypox Virus Real Time PCR Kit
Produkt details
Bedoeld gebrûk
It wurdt brûkt foar it opspoaren fan Monkeypox Virus yn minsklike serum- of lesionseksudaatmonsters troch it brûken fan realtime PCR-systemen.
Testprinsipe
Dit produkt is in fluorescent probe-basearre Taqman® real-time PCR-assaysysteem.Spesifike primers en probes binne ûntworpen foar de deteksje fan F3L-gen fan Monkeypox Virus.Ynterne kontrôle dy't rjochte is op it minsklike bewarre gen, kontrolearje de samplesammeling, sample-ôfhanneling en real-time PCR-proses om falsk-negative resultaten te foarkommen.De kit is in folslein premix lyofilisearre systeem, dat materialen omfettet dy't nedich binne foar Monkeypox Virus-deteksje: nukleïnezuur-amplifikaasje-enzyme, UDG-enzyme, reaksjebuffer, spesifike primer en probe.
Main Ynhâld
Oanlevere komponinten steane yn 'e tabel.
| Components | Pakket | Yngrediïnt |
| Monkeypox VirusLyophilized Premix | 8 strip PCR buizen× 6 pûdsjes | Primers, probes, dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Taq DNA polymerase, UDG Enzyme |
| MPV Positive Control | 400 μL × 1 buis | DNA-sekwinsjes dy't Target-gen befetsje |
| MPV Negative Control | 400 μL × 1 buis | DNA-sekwinsjes dy't minsklike gensegment befetsje |
| Oplossing oplossing | 1 mL × 1 tube | Stabilisator |
| Sertifikaat fan konformiteit | 1 stik | / |
Operaasje Flow
1. SampleSamling:Monster moat wurde sammele yn sterile buizen yn oerienstimming
mei standert technyske spesifikaasjes.
2. Reagent Preparation (Reagent Preparation Area)
Nim de komponinten fan 'e kit út, balansearje se by keamertemperatuer foar standby gebrûk.
3. Eksimplaarferwurking (proefferwurkingsgebiet)
3.1 Nucleic acid ekstraksje
It wurdt oanrikkemandearre om 200μL flüssige samples, Positive Control en Negative Control te nimmen foar nukleïnesûrekstraksje, neffens de oerienkommende easken en prosedueres fan virale DNA-ekstraksjekits.
3.2 Lyophilized poeder oplossen en template tafoeging
Bereid Monkeypox Virus Lyophilized premix neffens it oantal samples.Ien stekproef hat ien PCR-buis nedich dy't Lyophilized premix poeder befettet.Negative kontrôle en positive kontrôle moatte wurde behannele as twa samples.
(1) Foegje 15μL oplossende oplossing ta yn elke PCR-buis mei Lyophilized premix, foegje dan respektivelik 5μL ekstrahearre samples / Negative Control / Positive Control ta yn elke PCR-buis.
(2) Cover PCR buizen strak, flick PCR buizen mei de hân oant lyophilized poeder is folslein oplost en blended, sammelje de floeistof oan 'e boaiem fan PCR buizen troch instantaneous lege-snelheid centrifugation.
(3) As gebrûk fan mienskiplik Real-time PCR-ynstrumint foar detectie, dan direkt PCR-buizen oermeitsje nei it amplifikaasjegebiet;as jo BTK-8 brûke foar deteksje, moatte jo de folgjende operaasjes útfiere: 10 μL flüssigens fan PCR-buis oermeitsje nei de reaksjechipput fan BTK-8.Ien PCR-buis komt oerien mei ien put op 'e chip.Under pipetting operaasje, soargje derfoar dat de pipette is 90 graden fertikaal.De pipettips foar aerosolbarriêre moatte yn it sintrum fan 'e put pleatst wurde mei matige krêft en stopje mei it drukken fan' e pipet as it de earste gear berikt (om bubbels te foarkommen).Neidat de putten binne fol, nim út in reaksje chip membraan te dekken alle putten en de chip wurdt dan oerbrocht nei de amplification detection gebiet.
4. PCR-amplifikaasje (deteksjegebiet)
4.1 Set de PCR buizen / reaksje chip yn de reaksje tank en set de nammen fan elke reaksje goed yn 'e oerienkommende folchoarder.
4.2 Ynstellings fan detection fluorescence: (1) Monkeypox firus (FAM);(2) Ynterne kontrôle (CY5).
4.3 Run it folgjende fytsprotokol
Protokol fan ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| Stappen | Temperatuer | Tiid | Cycles | |
| 1 | Pre-denaturaasje | 95 ℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Denaturaasje | 95 ℃ | 10 s | 45 |
| Annealing, útwreiding, fluorescence acquisition | 60℃ | 30 s | ||
Protokol fan BTK-8:
| Stappen | Temperatuer | Tiid | Cycles | |
| 1 | Pre-denaturaasje | 95 ℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Denaturaasje | 95 ℃ | 5 s | 45 |
| Annealing, útwreiding, fluorescence acquisition | 60℃ | 14 s | ||
5. Analyse fan resultaten (ferwize asjebleaft nei Instrument User Manual)
Nei de reaksje wurde de resultaten automatysk bewarre.Klik op "Analyse" om te analysearjen, en it ynstrumint sil automatysk ynterpretearje Ct-wearden fan elke stekproef yn resultaatkolom.De negative en positive kontrôleresultaten moatte oerienkomme mei de folgjende "6. Kwaliteitskontrôle".
6. Kwaliteitsbeweitsing
6.1 Negative kontrôle: Gjin Ct of Ct>40 yn FAM-kanaal, Ct≤40 yn CY5-kanaal mei normale amplifikaasjekromme.
6.2 Positive kontrôle: Ct≤35 yn FAM-kanaal mei normale amplifikaasjekromme, Ct≤40 yn CY5-kanaal mei normale amplifikaasjekromme.
6.3 It resultaat is jildich as oan alle boppesteande kritearia foldien wurdt.Oars, it resultaat is ûnjildich.
Resultaat ynterpretaasje
De folgjende resultaten binne mooglik:
| Ct wearde fan FAM kanaal | Ct wearde fan CY5 kanaal | Ynterpretaasje | |
| 1# | Gjin Ct of Ct>40 | ≤40 | Monkeypox virus negatyf |
| 2# | ≤40 | Any resultaten | Monkeypox virus posityf |
| 3# | 40-45 | ≤40 | Re-test;as it noch 40 ~ 45 is, rapportearje as 1# |
| 4# | Gjin Ct of Ct>40 | Gjin Ct of Ct>40 | Unjildich |
NOAT: As ûnjildich resultaat optreedt, moat de stekproef sammele en opnij hifke wurde.
Order ynformaasje
| Produkt Namme | Kat.Nee | Grutte | Foarbyld | Shelf Life | Trans.& Sto.Temp. |
| Monkeypox Virus Real Time PCR Kit | B001P-01 | 48 tests / kit | Serum / Lesion Exudate | 12 moanne | -25 ~ -15 ℃ |
